Elisa實驗中血清的采集及注意事項

ELISA試劑盒實驗中，對于采集血清經常碰到很多問題：

1、標本采集后什么時候開始離心，有說采集半小時后離心的，還有說采集全血后在4℃過夜，再離心，如果采集后7-8小時再離心可以嗎？

2、離心時多少轉、離心幾分鐘比較合適

血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP 為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。一般說來，在5 天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。

實驗中，標本離心越早越好，但多數標本要30分鐘后才凝集完畢，離心時間在2小時內完成，（尤其生化）時間太長血液中的細胞成分會分解血漿中有機成分，離子也會發生轉移造成誤差；4度冷藏雖能降低紅細胞活性但細胞還會進行緩慢無氧酵解，血糖會明顯減低，冷藏時需分離血清儲存；對于酶免試驗影響較小，但時間太長也會引起偏差如蛋白質變性，水分蒸發造成誤差離心速度一般要求1500~3000轉之間（25000轉），離心速度低會離心不*，速度過快容易溶血，一般離心5~15分鐘即可（約10分鐘）。